星形膠質(zhì)細胞（astrocyte，AST），是哺乳動物大腦中體積最大的膠質(zhì)細胞，占整個膠質(zhì)細胞的20%~40%。星形膠質(zhì)細胞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)（central nervous system，CNS）中發(fā)揮重要作用，如參與突觸形成 、維持細胞內(nèi)外離子濃度恒定、參與神經(jīng)遞質(zhì)的傳遞、形成并維持血腦屏障。

本期細胞學堂為您整理了星形膠質(zhì)細胞細胞的分類、鑒定、原代分離培養(yǎng)步驟及注意事項，幫助大家快速上手、開展實驗~

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art 01、星形膠質(zhì)細胞分類

星形膠質(zhì)細胞（AST）傳統(tǒng)分為兩種：

01、纖維性AST

多分布在白質(zhì)，細胞突起細長，分支較少，胞質(zhì)內(nèi)含大量膠質(zhì)絲。組成膠質(zhì)絲蛋白質(zhì)稱膠質(zhì)纖維酸性蛋白質(zhì)(glialf ibrillaryacidicprotein，GFAP)。

纖維性星形膠質(zhì)細胞

02、原漿性AST

多分布在灰質(zhì)，細胞突起較短粗，分支較多，胞質(zhì)內(nèi)膠質(zhì)較少。

原漿性星形膠質(zhì)細胞

Part 02、形態(tài)和鑒定

普諾賽提取的大鼠神經(jīng)星形膠質(zhì)細胞鑒定圖

GFAP是星形膠質(zhì)細胞的骨架蛋白。胚胎神經(jīng)發(fā)育早期星形膠質(zhì)細胞前體的中間絲一般以波形蛋白為主，在星形膠質(zhì)細胞成熟時波形蛋白的表達水平降低，而GFAP表達增加并貫穿一生，因此，GFAP被公-認為星形膠質(zhì)細胞的特征性標記物。生理情況下腦內(nèi)少有表達，在病理狀態(tài)下出現(xiàn)反應性上調(diào)，其上調(diào)機制尚未完-全闡明。[1]

嚙齒動物和人類原生質(zhì)星形膠質(zhì)細胞的比較[2]

A: 典型的小鼠原生質(zhì)星形膠質(zhì)細胞。GFAP，白色。bar=20μm。

B: 相同規(guī)模的典型人類原質(zhì)星形膠質(zhì)細胞。bar=20μm。

C和D：人原生質(zhì)星形膠質(zhì)細胞是小鼠星形膠質(zhì)細胞的2.55倍。

E: 小鼠原質(zhì)星形膠質(zhì)細胞用DiI（白色）和sytox（藍色）雙極標記，顯示了星形膠質(zhì)細胞的完整結(jié)構(gòu)，包括其眾多的精細過程。bar=20μm。

F: 人類星形膠質(zhì)細胞的立體標記顯示了定義人類原生質(zhì)星形膠質(zhì)細胞的高度復雜的精細過程網(wǎng)絡。bar=20μm。[2]

Part 03、原代分離

1、從1-3天的新生鼠大腦組織初步分離細胞；

2、通過0.25%胰酶消化分離腦細胞；

3、獲得混合細胞后，經(jīng)300g離心10min，多次離心減少雜細胞；

4、差速貼壁30min~60min去除成纖維細胞；

5、后續(xù)培養(yǎng)換液時多次震蕩，持續(xù)純化細胞。

Part 04、培養(yǎng)注意事項：

星形膠質(zhì)細胞參考貼壁細胞常規(guī)培養(yǎng)方法培養(yǎng)即可，以下為培養(yǎng)時的3個注意事項：

① 可用常規(guī)0.25%胰酶消化；

② 可傳3代左右，持續(xù)傳代細胞形態(tài)會有少許變化；

③ 營養(yǎng)需求較低，普通培養(yǎng)基亦可生長，添加神經(jīng)生長因子后更利于形態(tài)維持和細胞增殖。